豬流感病毒亞單位基因工程疫苗 @ Google

豬流感病毒亞單位基因工程疫苗
構建豬流感病毒亞單位基因工程疫苗的方法有多種，其中報導較多的包括：
1）利用原核表達系統（大腸桿菌系統）或真核表達系統（酵母系統）在體外表達豬流感病毒流行毒株的HA基因和NA基因，然後收穫、濃縮和純化目的蛋白，再進一步製苗免疫。這種方法的優點是製備過程簡單、目的蛋白產量大、主要成分可以定量配置。但由於體外表達的蛋白難以維持或恢復天然蛋白的空間結構，蛋白純化過程複雜、成本高，而且總體免疫效果尚不及傳統的全病毒滅活疫苗，因此對這類疫苗從工藝方面還需進一步改進。
2）將豬流感病毒免疫原（HA和NA）基因單獨或者與細胞因子（白介素－6、Y干擾素等）編碼基因串聯後克隆到真核表達質粒中，然後再將重組DNA質粒導入機體細胞，通過機體內源性表達並提呈給免疫系統，誘導宿主產生特異性免疫應答，發揮保護作用，這就是所謂的DNA疫苗。研究結果表明，單純依靠豬流感病毒HA基因免疫的DNA疫苗效果並不理想（特異性抗體水平低、攻毒保護性差），如果共表達一些具有免疫調節作用的細胞因子，或者使用DNA疫苗後再用常規滅活疫苗進行加強免疫，則可以明顯提高免疫保護水平。但總體來看，這類DNA疫苗的免疫效果不確實，重複性差，與傳統全病毒滅活疫苗相比尚有一定差距，從實驗室階段到開發出成型產品還需要較長的時問。
　　3）活載體基因工程亞單位疫苗。目前，這是被人們寄予較大希望，並有可能實現商品化的疫苗。被用作載體的包括人腺病毒5型（human adenovirus 5，HAd5）、豬腺病毒3型（porcine adenovirus 3，PAV3）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、桿狀病毒（baculovirus）等。其中研究比較成熟的是以腺病毒為載體的豬流感亞單位基因工程疫苗，例如華南農業大學等單位開發的部分產品已進入轉基因安全評價和臨床實驗階段，預期開發前景良好。腺病毒載體具有許多優點：①腺病毒粒子相對穩定，病毒基因組重排頻率低，在包裝細胞內能有效複製；②安全性較好，尚未發現腺病毒與宿主基因的整合；③腺病毒基因組較大（約36kb），對外源基因的容量也大（目前已證實外源DNA插入容量可達7.5kb）；④腺病毒除了可在腸道和呼吸道繁殖以外，還可以感染肝細胞、血管內皮細胞、血管平滑肌細胞、神經膠質細胞等多種體細胞，並且，腺病毒感染對於受體細胞是否處於分裂期要求不嚴格；⑤腺病毒載體很容易將外源基因直接轉移到靶細胞中，使其獲得有效表達。研究證實，用攜帶H1N1亞型豬流感病毒HA S~HNA基因的重組腺病毒疫苗（2×109TCID ）對40日齡實驗豬免疫2週後，Hl抗體水平超過1：160，能有效抵抗同亞型豬流感強毒株的攻擊。人們在不斷開發新的活載體基因工程疫苗的同時，也在努力解決抗原濃縮、二次免疫受初次免疫抗體干擾、部分豬隻對細胞疫苗過敏等問題，希望不久的將來這類疫苗能夠得到廣泛應用，作為傳統全病毒滅活疫苗的補充。